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关于目前克隆技术研讨现状分析
2019-07-08作者:浏览次数:48

一、克隆的早期研讨
克隆一词是英文单词clone的音译,作为名词,c1one通常被意译为无性繁衍系。同一克隆内一切成员的遗传构成是完整相同的,例外仅见于有突变发作时。自然界早已存在自然植物、动物和微生物的克隆,例如:同卵双胞胎实践上就是一种克隆。但是,自然的哺乳动物克隆的发作率极低,成员数目太少(普通为两个),且缺乏目的性,所以很少可以被用来为人类造福,因而,人们开端探究用人工的办法来消费高等动物克隆。这样,克隆一词就开端被用作动词,指人工培育克隆动物这一动作。
目前,消费哺乳动物克隆的办法主要有胚胎分割和细胞核移植两种。克隆羊“多莉”,以及其后各国科学家培育的各种克隆动物,采用的都是细胞核移植技术。所谓细胞核移植,是指将不同发育时期的胚胎或成体动物的细胞核,经显微手术和细胞交融办法移植到去核卵母细胞中,重新组成胚胎并使之发育成熟的过程。与胚胎分割技术不同,细胞核移植技术,特别是细胞核连续移植技术能够产生无限个遗传相同的个体。由于细胞核移植是产生克隆动物的有效办法,故人们常常把它称为动物克隆技术。
采用细胞核移植技术克隆动物的想象,最初由汉斯·施佩曼在1938年提出,他称之为“奇特的实验”,即从发育到后期的胚胎(成熟或未成熟的胚胎均可)中取出细胞核,将其移植到一个卵子中。这一想象是如今克隆动物的根本途径。
从1952年起,科学家们首先采用青蛙展开细胞核移植克隆实验,先后取得了蝌蚪和成体蛙。1963年,我国童第周教授指导的科研组,首先以金鱼等为资料,研讨了鱼类胚胎细胞核移植技术,取得胜利。
哺乳动物胚胎细胞核移植研讨的最初成果在1981年获得——卡尔·伊尔门泽和彼得·霍佩用鼠胚胎细胞培育动身育正常的小鼠。1984年,施特恩·维拉德森用取自羊的未成熟胚胎细胞克隆出一只活产羊,其别人后来应用牛、猪、山羊、兔和猕猴等各种动物对他采用的实验办法停止了反复实验。1989年,维拉德森取得连续移核二代的克隆牛。1994年,尼尔·菲尔斯特用发育到至少有120个细胞的晚期胚胎克隆牛。到1995年,在主要的哺乳动物中,胚胎细胞核移植都取得胜利,包括冷冻和体外消费的胚胎;对胚胎干细胞或成体干细胞的核移植实验,也都做了尝试。但到1995年为止,成体动物已分化细胞核移植不断未能获得胜利。
二、克隆羊“多莉”的意义和惹起的反响
以上事实阐明,在1997年2月英国罗斯林研讨所维尔穆特博士科研组发布体细胞克隆羊“多莉”培育胜利之前,胚胎细胞核移植技术曾经有了很大的开展。实践上,“多莉”的克隆在核移植技术上因循了胚胎细胞核移植的全部过程,但这并不能减低“多莉”的严重意义,由于它是世界上第一例经体细胞核移植出生的动物,是克隆技术范畴研讨的宏大打破。这一宏大停顿意味着:在理论上证明了,同植物细胞一样,分化了的动物细胞核也具有全能性,在分化过程中细胞核中的遗传物质没有不可逆变化;在理论上证明了,应用体细胞停止动物克隆的技术是可行的,将有无数相同的细胞可用来作为供体停止核移植,并且在与卵细胞相交融前可对这些供体细胞停止一系列复杂的遗传操作,从而为大范围复制动物优秀种类和消费转基因动物提供了有效办法。
在理论上,应用同样办法,人能够复制“克隆人”,这意味着以往科幻小说中的专制狂人克隆本人的想法是完整能够完成的。因而,“多莉”的降生在世界各国科学界、政界乃至宗教界都惹起了激烈反响,并引发了一场由克隆人所衍生的道德问题的讨论。各国政府有关人士、民间纷繁作出反响:克隆人类有悖于伦理道德。虽然如此,克隆技术的宏大理论意义和适用价值促使科学家们加快了研讨的步伐,从而使动物克隆技术的研讨与开发进入一个高潮。
三、近3年来克隆研讨的重要成果
克隆羊“多莉”的降生在全世界掀起了克隆研讨热潮,随后,有关克隆动物的报道接连不时。1997年3月,即“多莉”降生后1个月,美国、中国台湾和澳大利亚科学家分别发表了他们胜利克隆猴子、猪和牛的音讯。不过,他们都是采用胚胎细胞停止克隆,其意义不能与“多莉”相比。同年7月,罗斯林研讨所和PPL公司宣布用基因改造过的胎儿成纤维细胞克隆出世界上第一头带有人类基因的转基因绵羊“波莉”(Polly)。这一成果显现了克隆技术在培育转基因动物方面的宏大应用价值。
1998年7月,美国夏威夷大学Wakayama等报道,由小鼠卵丘细胞克隆了27只成活小鼠,其中7只是由克隆小鼠再次克隆的后代,这是继“多莉”以后的第二批哺乳动物体细胞核移植后代。此外,Wakayama等人采用了与“多莉”不同的、新的、相对简单的且胜利率较高的克隆技术,这一技术以该大学所在地而命名为“檀香山技术”。
尔后,美国、法国、荷兰和韩国等国科学家也相继报道了体细胞克隆牛胜利的音讯;日本科学家的研讨热情尤为惊人,1998年7月至1999年4月,东京农业大学、近畿大学、牲畜改进事业团、中央(石川县、大分县和鹿儿岛县等)牲畜实验场以及民间企业(如日本最大的奶商品公司雪印乳业等)纷繁报道了,他们采用牛耳部、臀部肌肉、卵丘细胞以及初乳中提取的乳腺细胞克隆牛的成果。至1999年底,全世界已有6品种型细胞——胎儿成纤维细胞、乳腺细胞、卵丘细胞、输卵管/子宫上皮细胞、肌肉细胞和耳部皮肤细胞的体细胞克隆后代胜利降生。
2000年6月,中国西北农林科技大学应用成年山羊体细胞克隆出两只“克隆羊”,但其中一只因呼吸系统发育不良而早夭。据引见,所采用的克隆技术为该研讨组本人研讨所得,与克隆“多莉”的技术完整不同,这标明我国科学家也控制了体细胞克隆的尖端技术。
在不同种间停止细胞核移植实验也获得了一些可喜成果,1998年1月,美国威斯康星一麦迪逊大学的科学家们以牛的卵子为受体,胜利克隆出猪、牛、羊、鼠和猕猴五种哺乳动物的胚胎,这一研讨结果标明,某个物种的未受精卵能够同取自多种动物的成熟细胞核相分离。固然这些胚胎都流产了,但它对异种克隆的可能性作了有益的尝试。1999年,美国科学家用牛卵子克隆出珍稀动物盘羊的胚胎;我国科学家也用兔卵子克隆了大熊猫的早期胚胎,这些成果阐明克隆技术有可能成为维护和解救濒危动物的一条新途径。
四、克隆技术的应用前景
克隆技术已展现出宽广的应用前景,概括起来大致有以下四个方面:(1)培育优秀畜种和消费实验动物;(2)消费转基因动物;(3)消费人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法;(4)复制濒危的动物物种,保管和传播动物物种资源。以下就消费转基因动物和胚胎干细胞作扼要阐明。
转基因动物研讨是动物生物工程范畴中最诱人和最有开展前景的课题之一,转基因动物可作为医用器官移植的供体、作为生物反响器,以及用于牲畜遗传改进、创立疾病实验模型等。但目前转基因动物的实践应用并不多,除单一基因修饰的转基因小鼠医学模型较早得到应用外,转基因动物乳腺生物反响器消费药物蛋白的研讨时间较长,已停止了10多年,但目前在全世界范围内仅有2例药品进入3期临床实验,5~6个药品进入2期临床实验;而其农艺性状发作改进、可资畜牧消费应用的转基因牲畜品系至今没有降生。转基因动物制造效率低、定点整合艰难所招致的本钱过高和调控失灵,以及转基因动物有性繁衍后代遗传性状呈现别离、难以坚持始祖的优秀胜状,是限制当今转基因动物适用化进程的主要缘由。
体细胞克隆的胜利为转基因动物消费掀起一场新的反动,动物体细胞克隆技术为疾速放大转基因动物所产生的种质创新效果提供了技术可能。采用烦琐的体细胞转染技术施行目的基因的转移,能够防止牲畜生殖细胞来源艰难和低效率。同时,采用转基因体细胞系,能够在实验室条件下停止转基因整合预检和性别预选。在核移植前,先把目的外源基因和标志基因(如LagZ基因和新霉素抗生基因)的交融基因导入培育的体细胞中,再经过标志基因的表现来挑选转基因阳性细胞及其克隆,然后把此阳性细胞的核移植到去核卵母细胞中,最后消费出的动物在理论上应是100%的阳性转基因动物。采用此法,Schnieke等(Bio Report,1997)已胜利取得6只转基因绵羊,其中3只带有人凝血因子IX基因和标志基因(新霉素抗性基因),3只带有标志基因,目的外源基因整合率高达50%。Cibelli(Science,1997)同样应用核移植法取得3头转基因牛,证明了该法的有效性。由此能够看出,当今动物克隆技术最重要的应用方向之一,就是高附加值转基因克隆动物的研讨开发。
胚胎干细胞(ES)是具有构成一切成年细胞类型潜力的全能干细胞。科学家们不断试图诱导各种干细胞定向分化为特定的组织类型,来替代那些受损的体内组织,比方把产生胰岛素的细胞植入糖尿病患者体内。科学家们曾经可以使猪ES细胞转变为跳动的心肌细胞,使人ES细胞生成神经细胞和间充质细胞和使小鼠ES细胞分化为内胚层细胞。这些结果为细胞和组织替代疗法开拓了道路。目前,科学家已胜利别离到人ES细胞(Thomson等1998,Science),而体细胞克隆技术为消费患者本身的ES细胞提供了可能。把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构成重组胚,把重组胚体外培育到囊胚,然后从囊胚内别离出ES细胞,取得的ES细胞使之定向分化为所需的特定细胞类型(如神经细胞,肌肉细胞和血细胞),用于替代疗法。这种核移植法的最终目的是用于干细胞治疗,而非得到克隆个体,科学家们称之为“治疗克隆”。
克隆技术在根底研讨中的应用也是很有意义的,它为研讨配子和胚胎发作,细胞和组织分化,基因表达调控,核质互作等机理提供了工具。
五、克隆技术存在的问题
虽然克隆技术有着普遍的应用前景,但离产业化尚有很大间隔。由于作为一个新兴的研讨范畴,克隆技术在理论和技术上都还很不成熟,在理论上,分化的体细胞克隆对遗传物质重编(细胞核内一切或大局部基因关闭,细胞重新恢复全能性的过程)的机理还不分明;克隆动物能否会记住供体细胞的年龄,克隆动物的连续后代能否会累积突变基因,以及在克隆过程中胞质线粒体所起的遗传作用等问题还没有处理。
在理论中,克隆动物的胜利率还很低,维尔穆特研讨组在培育“多莉“的实验中,交融了277枚移植核的卵细胞,仅取得了“多莉”这一只成活羔羊,胜利率只要 0.36%,同时停止的胎儿成纤维细胞和胚胎细胞的克隆实验的胜利率也分别只要1.7%和1.1%,即便是运用“檀香山”技术,以分化水平较低的卵丘细胞为核供体,其胜利率也只要百分之几。
此外,生出的局部个体表现出生理或免疫缺限。以克隆牛为例,日本、法国等国培育的许多克隆牛在降生后两个月内死去;到2000年2月,日本全国已共有 121头体细胞克隆牛降生,但存活的只要64头。察看结果标明,局部犊牛胎盘功用不完善,其血液中含氧量及生长因子的浓度都低于正常程度;有些牛犊的胸腺、脾和淋巴腺未得到正常发育;克隆动物胎儿普遍存在比普通动物发育快的倾向,这些都可能是死亡的缘由。
即便是正常发育的“多莉”,也被发现有早衰迹象。染色体的未端被称为端粒,它决议着细胞可以团结的次数:每一次团结端粒都会缩短,而当端粒耗尽后细胞就失去了团结才能。1998年,科学家发现“多莉”的细胞端粒比正常的要短,即其细胞处于更衰老的状态。当时以为,这可能是用成年绵羊的细胞克隆“多莉”形成的,使其细胞具有成年细胞的印记,但这一解释目前遭到了应战,美国马萨诸塞州的医生罗伯特·兰扎等用培育的衰老细胞克隆牛,得到6头小牛,出生5~10个月后发现这些克隆牛的端粒比普通同龄小牛要长,有的以至比普通重生小牛的端粒还长。如今还不分明这一现象的缘由,也不分明为何与“多莉“的状况有宏大差异。但这一实验阐明,在一些状况下克隆过程能改动成熟细胞的分子钟,使其“恢复青春”,关于这种变化对克隆动物寿命的影响,还有待于进一步察看。
除了以上的理论和技术障碍外,克隆技术(特别是在人胚胎方面的应用)对伦理道德的冲击和公众对此的激烈反响也限制了克隆技术的应用。但几年来克隆技术的开展标明,世界各科技大国都不甘落后,谁也没有放弃克隆技术研讨。这一点上英国政府的态度十分具有代表性,在1997年2月底宣布中止对“多莉”研讨小组投资后不到1个月,英国科技委员会就对克隆技术发表专题报告,标明英国政府将重新思索这一决议,以为自觉制止这方面的研讨并不是明智之举,关键在于树立一定的标准应用它为人类造福。
摘自《世界农业》

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